Les travaux de recherche de l’EA4308 (Gamétogenèse et Qualité du Gamète, CECOS de Rouen Normandie) portent sur la conservation et la restauration de la fertilité chez les hommes ayant eu un cancer pendant l’enfance. En effet, en France, on dénombre plus de 2000 nouveaux cas de cancer de l’enfant par an. Les traitements par chimiothérapie ou radiothérapie peuvent conduire à une infertilité chez les patients guéris. C’est pourquoi, lorsqu’un cancer est dépisté chez les patients pré-pubères, il est possible de congeler des fragments testiculaires. Dans le futur, ces tissus testiculaires conservés pourront être utilisés afin, entre autre, d’obtenir des spermatozoïdes in vitro utilisables en assistance médicale à la procréation. Ainsi, nous avons démontré la réalisation complète in vitro d’une spermatogenèse à partir de tissu testiculaire pré-pubère murin frais ou décongelé (congélation lente ou vitrification). Il s’avérait alors nécessaire de s’assurer que le processus de spermatogenèse reproduisait les évènements physiologiques de la spermatogenèse in vivo et plus spécifiquement en ce qui concerne les marques épigénétiques. En effet, au cours de la spermatogenèse, de nombreuses modifications épigénétiques comme la méthylation de l’ADN prennent place dans les cellules germinales. La méthylation des cytosines se fait par l’intermédiaire d’enzymes appelés ADN méthyle transférases (DNMT). Dans cette étude, nous nous sommes intéressés à évaluer l’impact des méthodes de congélation et de la maturation in vitro des tissus testiculaires sur la mise en place de la méthylation de l’ADN dans les cellules de la lignée germinale. Les résultats obtenus mettent en évidence que les méthodes de congélation des tissus testiculaires pré-pubères n’impactent pas l’expression des transcrits Dnmt et la présence de ces enzymes dans les spermatogonies. De plus, après trente jours de culture des tissus pré-pubères frais ou décongelés, les spermatogonies et les spermatocytes leptotènes et zygotènes expriment les transcrits des Dnmt ainsi que leurs protéines. De plus, ces types cellulaires présentent des cytosines méthylés comparables aux contrôles in vivo.

Cette étude a mis en évidence pour la première fois que la conservation du tissu testiculaire pré-pubère murin, ainsi que sa maturation in vitro n’ont pas d’impact sur l’expression des enzymes intervenant dans la mise en place et le maintien des méthylations de l’ADN dans les cellules germinales. Ces résultats sont donc encourageants en vue d’une application humaine de la congélation ou vitrification du tissu testiculaire suivi de sa maturation in vitro. Contrairement à l’autogreffe, la maturation in vitro présentera l’avantage d’éviter l’éventuelle réintroduction de cellules cancéreuses chez le patient guéri.

Antoine Oblette, Ludovic Dumont, Amandine Bironneau, Nathalie Rives, Christine Rondanino

EA 4308 « Gamétogenèse et Qualité du Gamète », Laboratoire de Biologie de la Reproduction-CECOS, CHU-Hôpitaux de Rouen, Rouen Normandie Université, 76031 Rouen.